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畢赤酵母蛋白表達載體

概述

我們的畢赤酵母重組蛋白表達載體系統(tǒng)有著非常強大高效的重組蛋白表達能力。畢赤酵母作為一種甲基營養(yǎng)型酵母,被廣泛應用在蛋白產(chǎn)品的研究和工業(yè)應用上。

在該載體系統(tǒng)中,目的基因通常被克隆在甘油醛-3-磷酸脫氫酶啟動子(GAP)和乙醇氧化酶1啟動子(AOX1)的下游,這取決于基因的基本結構和表達誘導條件的要求。GAP是一個強大的組成型啟動子,而AOX1則是受甲醇嚴格高效調控的啟動子,這兩個啟動子都能夠介導目的基因的高水平表達,目的蛋白的累加總量往往可達總細胞可溶性蛋白的30%以上。一般來說,GAP啟動子的表達能力略強于誘導狀態(tài)下的AOX1啟動子。我們建議您做一個時間曲線測試,以確定表達目的蛋白的最佳啟動子類型。

與釀酒酵母不同的是,畢赤酵母以甲醇為基礎碳源,能更高水平地介導重組蛋白的表達(通常是釀酒酵母的的10-100倍)。另外,畢赤酵母和釀酒酵母在技術上有許多共通之處(如互補作用),通用的基因注釋和遺傳命名法簡化了兩個物種的研究。

關于該載體系統(tǒng)的更多信息,請參考以下文獻。

參考文獻主題
Gene. 186:37 (1997)Description of GAP promoter
Mol Cell Biol. 5:1111 (1985)
Yeast. 5:167 (1989)
Description of AOX1 promoter
亮點

該載體系統(tǒng)用于在畢赤酵母中組成型或誘導型表達重組蛋白,目的基因被克隆在組成型啟動子GAP或甲醇誘導型啟動子AOX1的下游。

優(yōu)勢

高表達:GAP和AOX1都能介導目的基因的高水平表達。

嚴格控制表達:在無甲醇的情況下,AOX1啟動子無法介導目的基因的表達;有甲醇的存在下,目的基因被強烈激活表達。

不足之處

潛在的泄漏表達:GAP是組成型啟動子,表達水平不會受到調控;其次,雖然AOX1啟動子在缺乏甲醇的條件下會被抑制,但少數(shù)情況下目的基因也會發(fā)生泄漏表達。

載體關鍵元件

Promoter: Drives high-level transcription of the gene of interest.

Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest because it is believed to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

AOX1 TT: The transcription terminator from P. pastoris alcohol oxidase 1. This facilitates transcriptional termination and polyadenylation of mRNA in yeast.

Zeocin: Zeocin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by Zeocin selection in E. coli and yeast.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in high copy numbers in E. coli.

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